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高中生物学
/
1.
(2021高三上·浙江月考)
热激蛋白(HSP)是一类在受到逆境刺激后大量表达的蛋白质,为揭示热激蛋白在耐旱的复苏植物中的保护作用,研究人员对复苏植物旋蒴苣苔HSP40家族中结构域蛋白的编码基因B进行了表达与功能分析。回答下列问题:
(1) 用总RNA提取试剂盒提取样品总RNA,纯化后用
酶合成cDNA,作为基因
及荧光定量PCR的模板。
(2) 载体构建与转基因拟南芥的获得。先构建含B基因的表达载体。再用
法转化拟南芥(一个B基因整合到一条染色体上)。经10 mg·L
–
1
草胺膦(PPT)筛选得到T
1
代阳性植株,再用PPT筛选T
2
代种子,则筛选后纯合转基因株系所占比例为
。
(3) 为研究不同热激温度对转基因拟南芥抗逆性的影响,取在1/2 MS + 1%蔗糖+ 0.6%
的培养基上生长1周左右长出真叶的拟南芥幼苗;处理1:将拟南芥幼苗置于37℃培养1小时,再置于22℃培养3小时,然后于49℃热激1小时;处理2:直接将拟南芥幼苗置于45℃
。2种处理结束后,将幼苗置于22℃、相对湿度为50%、光照周期为16小时光照/8小时黑暗的
培养室培养。
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【知识点】
PCR技术的基本操作和应用
植物组织培养的过程
基因工程的基本操作程序
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